人生就是博-尊龙凯时为您提供人B细胞淋巴瘤OCILy19的培养说明，以下内容详细阐述了细胞培养的必要条件及操作步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代；传代情况：2天换液
备注：请使用无菌离心管收集培养基以保持过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接采购我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，需将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方法。收到细胞时使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最佳为40x，100x，200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若不提供照片，则默认细胞状态良好。（传代后建议一瓶继续使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基进行对比培养，换液后请将瓶盖稍微松开。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基在37℃、5%CO2的孵箱中。如细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用PBS对细胞进行润洗1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，置于37℃孵箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况；若大部分细胞变圆并脱落，迅速将其移回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩至变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中保存，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶，用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟；
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶中，继续培养于37℃、5%CO2细胞培养箱；
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于某些细胞不易粘附，运输过程中可能出现细胞脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将所有培养液收集至离心管，进行离心后收集上清作过渡培养，再次处理细胞时可加入胰酶进行重悬，消化后终止反应再进行离心和重悬操作。分瓶传代比例仍为1:2，补充完全培养基至所需容量，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

人生就是博-尊龙凯时承诺对细胞培养过程中可能遇到的问题提供解决方案。涉及重发的情况有：运输途中的丢失、瓶身破损、培养液严重漏液；细胞污染需在收到产品48小时内反馈真实实验结果；常温发货细胞存活率低于预期，以及其他影响细胞活性的因素等。关于不予重发的情况，则包括客户原因造成的细胞污染及状态不良等。因此，确保在收到细胞后的前3天拍摄状态照片至关重要。