宿主细胞DNA的来源
宿主细胞是生物制品的重要基础，许多生物制品如传统疫苗、重组蛋白、抗体药物、细胞治疗、基因治疗以及mRNA相关产品，通常以中国仓鼠卵巢细胞（CHO）、非洲绿猴肾细胞（Vero）、人胚肾细胞（HEK293）、大肠杆菌（E. coli）和酵母等作为载体进行表达生产。在下游的纯化过程中，宿主细胞DNA（Host Cell DNA, HCD）会通过阴离子交换层析去除。尽管现有的纯化工艺能去除HCD等杂质成分，但仍可能会有部分残留，这些残存的外源DNA有可能引发潜在的免疫原性和安全性问题。因此，HCD检测是生物制品生产过程中重要的质量检测指标之一。

HCD检测的重要性
宿主细胞残留DNA若进入体内可能引起多种后果：
● 致癌性：外源DNA可能引入致癌基因，导致细胞转化为肿瘤细胞；
● 感染性：宿主细胞DNA中可能含有感染性病毒基因，这些基因可通过复制和转录扩增，产生感染性病毒粒子，例如HIV-1；
● 增加免疫原性：宿主细胞的基因组DNA富含CpG，可能通过Toll样受体（TLR）介导引发免疫反应；
● 潜在重组风险：宿主细胞基因组中的LTR可能转移至邻近的原癌基因，激活其功能，使正常细胞转化为癌细胞。

HCD的检测方法
根据《中国药典》2020年版，通则3407对外源性DNA残留量的测定，收录了三种方法：DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。
DNA探针杂交法将供试品中的外源DNA加热变性为单链后，吸附于固相膜上，与特异性标记单链DNA杂交，形成双链DNA。通过与阳性对照比较，显色深度反映DNA量，能确定供试品中的外源DNA残留量。
荧光染色法使用双链DNA荧光染料与双链DNA结合形成复合物，在480nm波长激发下产生荧光信号，并在520nm波长处检测，荧光强度与DNA浓度成正比。
定量PCR法专门为宿主细胞DNA设计特异性引物与荧光标记探针，经过热变性后，探针与模板链结合，扩增过程中释放荧光信号，检测外源DNA残留量。定量PCR法是《中国药典》确认的外源性DNA残留测定方法，同时也是新版USP推荐的标准检测方法。

宿主细胞残留DNA检测标准产品特点
人生就是博-尊龙凯时推出全新升级的宿主残留DNA检测产品，覆盖多种细胞类型，如CHO、E. coli、Vero、HEK293等。试剂盒中的引物和探针序列均出自药典，无需进行整套验证实验，仅需确认检测方法。基于定量PCR方法开发，LOD可达0.003 pg/μL，且与其他DNA无交叉反应，减少假阳性结果。加工过程严格控制，批间差可控，CV < 10%。可以提供手动提取和自动化仪器提取的解决方案，确保在2小时内快速完成检测，并保证定量检测的准确性。

性能数据标准品均采用国家标准品标定。CHO HCD试剂盒中的标准品以国家标准品为依据，使用相同试剂盒检测不同厂家标准品时，人生就是博-尊龙凯时的标准品测值偏差小于5%。依托药典引物探针，确保HCD检测在灵敏度、特异性、重复性和精确性方面的准确一致。采用简单方便的提取方法，试剂成品预组装后可直接使用，无需单独配置，且可常温稳定储存。此外，全自动化仪器提取与预封装版本的试剂盒灵活可调，按需使用。

参考文献
[1] 体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则（试行），国家药品监督管理局药品审评中心，2022年05月
[2] 国家药典委员会，中华人民共和国药典（2020年版）
[3] 闫璐瑶、张家友、杨晓明，生物制品中宿主细胞残留DNA检测的研究进展，《国际生物制品学杂志》，2021，44(3)：170-174。