人生就是博-尊龙凯时的人小胶质细胞HMC3培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S

传代方法：建议第一次以1:2比例传代；如传代效果不佳，建议直接选购我们的完全培养基。

二、细胞处理及运输

在收到细胞后，待其状态良好后，填满完全培养液并封好瓶口为最佳运输方式。收到细胞时，用75%酒精喷洒消毒整个细胞瓶，随后放在超净台内确保无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。建议用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x下的照片）。前三天的照片是售后服务的重要依据，若未提供照片则默认为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度低于80%，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml继续在37℃、5% CO2下培养。若细胞密度超过80%，按照以下步骤进行传代：
1. 废弃培养上清，用不含钙镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，之后借助显微镜观察细胞状态。若细胞变圆并开始脱落，立即快速处理，轻敲培养瓶，添加过量完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清并以1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 将细胞悬液按照1:2比例分装至两个T25瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，待其变圆后添加5ml完全培养基以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，随后转移至15ml离心管中并在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液，混匀后装入冻存管中。
4. 冻存细胞可直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意防护），迅速将其放入37℃水浴中解冻至无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换成新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟以进行过渡培养。然后加入胰酶进行重悬和消化，处理后再离心并补充完全培养基，最后按1:2比例分瓶传代并补充新的完全培养基。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况

以下情况可重发：
1.细胞运输中丢失、瓶身破损或培养液漏液。
2.细胞污染，需在48小时内提供真实实验结果。
3.常温发货的细胞在静置24小时后大多数未存活，需提供清晰的细胞状态照片。
4.干冰运输细胞复苏后24小时内或常温货物未开封4小时内出现污染。
5.细胞活性问题，需在七天内提供活力测试结果。
6.请在收到细胞当天及接下来两天内拍照，若三天内未告知视为合格，4-7天内需提供前三天照片及详细操作步骤。由技术人员判定责任后可重发。

2）细胞问题的不予重发情况

以下情况无重发：
1.客户造成污染。
2.错误操作导致细胞状态不佳。
3.非推荐培养体系导致的细胞状态不好。
4.未提供细胞培养前三天照片。
5.任何变更处理后的细胞。
6.收到后未在两天内告知。
7.视具体情况确定。

通过以上细节与注意事项，确保您在使用人生就是博-尊龙凯时的人小胶质细胞HMC3时得到最佳结果。