胎牛血清的储存通常建议在-20℃,如需长期保存则可选择-80℃的温度。在解冻过程中,避免将血清直接置于常温(25-37℃)下,因这容易产生絮状沉淀,进而可能对血清的品质造成影响。推荐的解冻方式是将血清从-20/-80℃转移至4℃,待完全化冻后再转至室温。在解冻过程中,需轻轻晃动血清,以确保其成分与温度均匀混合,从而减少沉淀的产生。
解冻后的胎牛血清可以分装至15mL或50mL的无菌离心管中进行冻存。根据使用频率,建议可在4℃下保存一管已化冻的血清,以便频繁配制培养基。然而,4℃下的储存时间不宜过长,最好在一个月内使用完毕。不建议将解冻后的血清在37℃或室温下存放过久,以避免重要细胞生长因子的失活,从而影响细胞的状态。
在使用胎牛血清时,添加量不宜过多,通常推荐5%、10%或20%浓度。大多数细胞在培养时使用10%的血清,而某些原代细胞则可能需要20%的血清浓度。具体适合某种细胞的血清浓度需基于细胞特性及实验目的进行调整。
热灭活(一般处理条件为56℃,30分钟)能够去活化补体,补体参与的反应如溶细胞活性等。因此,在某些特殊实验中可能需要进行热灭活,但对大多数常规细胞培养而言并非必要。经过热灭活处理的血清对细胞生长的作用极小,甚至因为高温处理而降低血清质量,影响细胞生长速率,增加沉淀。
在细胞培养中,可能会遇到需要更换血清的情况。如果直接使用新的血清进行培养,可能导致之前生长良好的细胞突然变缓甚至脱壁死亡。这通常是因为细胞已经适应了原有的培养环境,突如其来的营养环境改变会导致细胞不适。因此,在更换血清时,建议采取梯度替换法,以帮助细胞适应新的培养条件。在复苏细胞时,最好使用原培养体系,等细胞状态恢复后再加以测试,而测试时应遵循1:3、1:1、3:1的比例逐渐替换。
若解冻后发现少量乳白色的絮状物,主要是由血清中的脂蛋白及纤维蛋白所致,这些物质一般不会影响血清的质量。可以通过400×g离心5分钟后取上清,通常不会对细胞产生太大影响。
一般情况下,厂家提供的胎牛血清为无菌状态,通常无需再进行过滤。如发现悬浮物,应将血清加入培养液中共同过滤,而不是直接过滤血清。若在细胞培养过程中观察到黑点,应首先检查培养基是否混浊,如果黑点随之而动而不规则,则可能是细胞受到了污染。污染包括细菌及支原体等。如果在显微镜下观察细胞状态良好且未发生变化,黑点出现可能与以下几种情况有关:细胞生长过程中的细胞残骸、反复冻融造成的血清杂质,或是水质和容器不合格导致的问题。这些黑点可以通过离心或过滤的方法去除,对于原代细胞的小黑点可能是来源于原代组织中的杂质,经过多次传代可逐步消除。
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