在上一篇文章中，我们介绍了细胞转染的应用和分类基础知识。本期将为大家科普病毒转染在细胞转染中的常见应用。病毒转染技术是一种高效的细胞转染方法，通过病毒载体将外源基因包裹并导入宿主细胞，使得目标基因能够稳定表达。病毒载体主要分为腺病毒（Adenovirus, ADV）、慢病毒（Lentivirus, LV）、逆转录病毒（Retrovirus, RV）和腺相关病毒（AAV）。目前，实验室中使用最为广泛的是慢病毒，接下来我们将深入探讨这一领域。

一、慢病毒的结构

慢病毒是一种基于HIV-1发展而来的基因治疗载体，属于有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称结构。其结构包括最外层的包膜，内含基质蛋白和衣壳，最核心部分为两条相同的正链RNA及多种酶（如逆转录酶、整合酶和蛋白酶）。慢病毒的基因组较为复杂，以HIV-1为例，含有9个基因，其两端为反向末端重复序列（LTR），中间则包括多个编码和调节基因。随着对慢病毒基因组的研究不断深入，人们对其进行了基因编辑，发展出第一代、第二代和第三代慢病毒系统，其中第二代和第三代系统由于其安全性和包装能力，得到了广泛应用。

二、慢病毒的复制与包装

为了提高靶细胞的转染效率，前期需获得高滴度的慢病毒。通常将三种质粒按照一定比例共转染到293T细胞中，经过48至72小时后，收集含有病毒的上清液，随后可进行离心和浓缩，以获取所需的慢病毒。

三、慢病毒感染细胞的过程

慢病毒通过其包膜蛋白与宿主细胞表面受体结合，随后与细胞膜融合，释放病毒的基因组和酶。在逆转录酶的作用下，慢病毒RNA转录成DNA，并与整合酶形成复合物，进入细胞核后整合到宿主基因组中。最终，外源基因在宿主细胞中表达。

四、常见的慢病毒转染类型

1. 慢病毒荧光转染：通过转染荧光蛋白基因（如GFP、mCherry或RFP），可筛选出带有荧光的细胞，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测转染效率。

2. 慢病毒萤光素酶转染：转染萤光素酶基因后，细胞可产生萤光素酶，在合适的底物和条件下，释放出荧光，适用于活体动物中的肿瘤监测。

3. 慢病毒细胞永生化转染：通过慢病毒技术将永生化基因转入原代细胞，打破其分裂次数限制，获得具有无限增殖能力的细胞株。

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