实验原理

植物中的病理组织如果被感染了真菌菌丝体，若环境条件适宜，通常能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离是指通过人工培养，人工将病原真菌从染病植物组织中与其他杂菌分开，继而将这些病原菌从寄主植物中分离出来，并进行纯化。这一过程统称为植物病菌的分离培养。一般而言，植物病原真菌的分离多采用组织分离法，即切取小块病变组织，进行表面消毒和灭菌水洗后，转移至人工培养基上进行培养。

实验目的

植物病原菌的分离培养是植物病理学实验的基本操作技术之一，广泛应用于病害鉴定、病原形态观察及植物病害接种体的培养等研究领域。本实验旨在掌握植物病原菌分离培养的一般原则和方法。

实验步骤

（一）分离前的准备工作

1. 工作环境的清洁和消毒

分离培养一般在无菌室、无菌箱或超净工作台上进行。无菌室和无菌箱需经过喷雾除尘，并用药物或紫外线进行消毒（常用的消毒药物包括70%酒精、2%煤酚皂液及5%苯酚液等，喷雾消毒时间应不少于20-30分钟）。如果没有上述设备，可以在清洁的房间关闭门窗，避免空气流动，利用喷雾去除空气及地面灰尘后进行操作。工作前应擦净桌面，最好铺上湿纱布。将所需物品按顺序整齐放置在工作台上，避免在工作时走动，操作人员应穿上经过灭菌的工作服、口罩，并用肥皂洗手后再用70%酒精或0.1%新洁尔灭擦手。

2. 分离用具的消毒

与分离材料接触的器具（如刀、剪、镊、针等）必须保持无菌状态，使用前需将这些用具浸泡在70%酒精中，使用时在火焰上灭菌，烧去酒精的过程应为2-3次（须注意刀、剪、镊等器具不要在火焰上烧太长时间，以免造成退火）。再次使用时，必须重复灭菌。培养皿及实验器具需经过干热灭菌处理，培养基及洗涤用蒸馏水也需提前高压蒸汽灭菌。

3. 分离材料的选择

选择新发病的植株、器官或组织作为分离材料，有助于减少腐生菌的污染。任何植物的坏死部分，不论内部或表面，都可能存在腐生微生物，因此针对斑点病害，应从邻近健康组织，即病变与健全组织的交界处提取分离材料。

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