人生就是博-尊龙凯时旗下大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养方案如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁与悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：初次建议1:2传代，通常每2天更换一次培养液。
备注：悬浮细胞需离心收集，贴壁细胞应按照规范处理，培养基应留作过渡培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应尽快培养至良好状态，并完全填满培养液，封口以保证运输的安全。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内完成无菌操作。随后，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，确保细胞状态稳定后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，建议拍照留存，特别是在培养的前三天，这将成为重要的质控依据。如未提供照片，则默认细胞状态正常。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

对于未超过80%汇合度的细胞，收集完全培养液至离心管，留5ml培养基培养于37℃、5% CO2。如果细胞密度超过80%，则可进行传代培养。
对于贴壁细胞，建议以下方法进行传代：
1) 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次；
2) 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，37℃培养1-2分钟，显微镜观察细胞状态，若细胞开始脱落则加5ml培养基终止消化；
3) 将悬液转移至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中；
4) 将细胞悬液以1:2的比例分装至新瓶中，补充新鲜培养基至5-8ml，然后放入培养箱中继续培养。
对于悬浮细胞，可参考以下2种方法进行传代：
方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃去上清后补加1-2ml培养液，吹匀后按1:2比例分装至新瓶中。
方法二：采用半数换液策略，弃去一半培养基，保持剩余细胞悬浮，按比例分装。

b. 细胞冻存

1) 当细胞生长至覆盖幅面80%时，弃去培养液并以PBS清洗；
2) 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，显微镜观察细胞形态，待其回缩时加5ml培养基终止消化；
3) 将悬液转移至离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清后加入1ml无血清冻存液C7001，混匀后装入冻存管；
4) 最后将冻存管直接存放于-80℃冰箱，若后续需转至液氮罐中，需在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1) 从液氮中取出冻存管并迅速放入37℃水浴解除冻；
2) 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟；
3) 弃去上清，重悬在5ml完全培养基中，接种于T25培养瓶，在37℃和5% CO2下培养，次日更换为新鲜培养基。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这属正常现象。如脱落细胞较多，可将培养液收集到离心管中，离心后处理；然后重悬后进行传代。
在整个操作过程中，若有任何问题，请及时与我们联系，以确保细胞的质量与实验的可靠性。

五、售后条款

1) 出现问题重发的情况包括但不限于：运输损坏、细胞污染、活性问题等。请根据具体标准及时反馈实验结果，以便我们核实及重发；
2) 不予重发的情况包括客户操作不当、异质处理等。请保持注意，遵循正确的操作规范，以确保细胞的良好状态。
人生就是博-尊龙凯时将致力于为您提供优质的细胞资源与服务。