随着细胞治疗领域的快速进步，诱导多能干细胞（iPSC）的稳定和可重复扩增变得至关重要。这些进展依赖于系统化的生物过程设计，通过识别和优化关键工艺输入变量（PIVs），iPSC在生物反应器中的扩增实现了更高的稳健性和可重复性。这样的改进不仅降低了生产成本和周期，还为大规模生产及临床应用奠定了基础。

iPSC及其衍生特化细胞的生产过程颇为复杂且耗时，涉及多个相互依赖的PIVs。针对临床应用所需的大规模iPSC衍生细胞（超过10^8个细胞），大规模生物反应器不可或缺。然而，操控大规模反应器的成本高昂，因此在确保细胞产量及质量的前提下，需要首先建立一个在100-500mL小规模下稳健且可重复的生产流程。

实验过程中，每个单元操作和它们之间的过渡都会引入新的PIVs。过程输出变量（POVs），例如细胞产量、活力、生长速度等，都会受每个PIV的影响。在生物工艺开发领域，PBSBiotech通过使用微缩版的垂直轮（VW）生物反应器（如PBS-01和PBS-05Mini），成功建立了一套标准化的iPSC扩增工作流程。该流程不仅具备良好的稳健性和重复性，而且能够轻松扩展至大容量的PBS-15反应器，为iPSC的生产提供了可靠的工具。

尤其是在iPSC制造领域，由于缺乏详细的实验方案和标准化结果报告，各实验室之间难以对比不同的iPSC培养方法。尽管已有研究报告了3D悬浮培养的细胞生长性能指标，但数值差异较大，缺乏一致性。为了确保实验的可复制性和稳健性，PBS开发了一套基线iPSC扩增协议（Baseline Protocol），并在两个iPSC细胞系上经过多次验证，涵盖了多种操作员和不同培养基。

此外，iPSC聚集体分化为自然杀伤（NK）免疫细胞的过程，受到胚体（EB）大小和密度的关键影响。这些PIV可以通过调整生物反应器的搅拌速率和培养基更换策略进行优化。

值得注意的是，若要获得功能性细胞，培养基需要模拟体内环境，Biolaminin蛋白正是关键环节。BioLamina品牌的Biolaminin-521在维护多能干细胞的生长和分化方面效果显著，且不含动物成分，更符合临床应用标准。

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