人生就是博-尊龙凯时为您提供小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205的培养指南，确保细胞的健康生长和培养过程的规范化。

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基+10% FBS

传代方法：首次建议以1:2的比例传代，2天更换培养液。

备注：使用无菌离心管收集培养基进行过渡对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，培养至良好状态并灌满完全培养液，封好瓶口以确保运输后的最佳状态。收到细胞时，先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。建议在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如未提供照片，默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%的汇合度时，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%，具体传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护手套），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

有些细胞较为特殊，如贴壁能力不强，运输过程中容易脱落，这是正常现象。请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养，再加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后消化1-2分钟，加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清液，并加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

关于细胞出现问题的重发情况和不予重发的情况有如下规定：

1）可重发的情况：

1. 细胞在运输过程中遇到的各种问题，如丢失、瓶身破损或严重漏液，均可重发。
2. 细胞污染问题请在收到产品后48小时内提供真实实验结果，核实后进行重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时内未开封发生污染，均可重发。
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法确认细胞活力，核实后可重发。
6. 细胞收到当天以及第2、3天需拍照，3天内未告知的，视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片及详细操作步骤，经过技术人员确认属于我方责任的，方可重发。

2）不予重发的情况：

1. 因客户原因造成的细胞污染，不予重发。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不良，不予重发。
3. 因非本库推荐培养体系导致的细胞状态不良，不予重发。
4. 细胞状态不良且未提供细胞培养前3天照片的，不予重发。
5. 细胞培养过程中经其它处理的，不予重发。
6. 细胞收到2天内未告知的问题，不予重发。
7. 视具体情况而定。

请您在使用过程中，保持对人生就是博-尊龙凯时的信任与支持，如有任何问题，欢迎随时联系我们。