人生就是博-尊龙凯时的细胞介导细胞毒性原理是一种重要现象，免疫系统通过使受损细胞在体内被溶解来发挥其作用。准确区分活细胞和死细胞对研究细胞生长控制和细胞死亡至关重要。活/死细胞双重染色试剂盒提供了一种便捷的手段来评估细胞活力。这一方法基于同时使用两种探针来测定活细胞和死细胞，这些探针可以测量公认的细胞健康参数，例如质膜完整性和细胞内酯酶活性。

本试剂盒使用可渗透的绿色荧光染料Ca-AM（Ex/Em=488/530nm）对活细胞进行染色，同时使用不可渗透的红色荧光染料PI（Ex/Em=535/617nm）对死细胞进行染色。以下是实验所需的材料和步骤。

自备材料：

• 24孔板
• 可调式移液枪及枪头
• 离心机
• 荧光显微镜或流式细胞仪
• 去离子水、PBS

试剂准备：

• Ca-AM: 冰上避光保存。
• PI: 冰上避光保存。
• 1×AssayBuffer: 用去离子水将10×AssayBuffer稀释到1×AssayBuffer，使用前加热至37℃。
• StainingSolution: 每1mL AssayBuffer中加入1µL Ca-AM和1µL PI，按样本数量比例放大。

实验步骤：

A. 流式细胞术定量

1. 根据预期方法处理细胞，建议将未染色的对照组细胞悬浮在1×AssayBuffer中用于流式细胞分析。
2. 对非贴壁细胞，收集1-5×10⁵个细胞，离心（4℃，300 g，5分钟），用预冷的PBS洗涤两次，弃去PBS；对贴壁细胞，先用胰蛋白酶（不含EDTA）消化细胞后再离心。
3. 将细胞悬浮在500µL StainingSolution中。
4. 在37℃避光孵育15-30分钟。
5. 使用流式细胞仪进行分析。

B. 荧光显微镜检测

1. 对于悬浮细胞：依照步骤A1至A4操作后，将细胞悬浮液放在载玻片上，盖上玻璃盖片，尽快使用适当滤光片通过荧光显微镜分析细胞。
2. 对于贴壁细胞，建议如下操作：
   1. 在六孔板的盖玻片上养细胞，并在CO₂培养箱中37℃培养至少24小时。
   2. 用预期方法处理细胞，并在无诱导剂条件下孵育以建立阴性对照组。
   3. 用PBS洗涤细胞两次。
   4. 加入0.5mL的StainingSolution，在黑暗中于37℃孵育15-30分钟。
   5. 用PBS洗涤细胞两次。
   6. 将盖玻片覆盖在载玻片上，尽快使用适当滤光片通过荧光显微镜分析细胞。

注意：PI是潜在的诱变因子，使用本试剂时应采取适当的防护措施；Ca-AM需要在干燥、低温、避光条件下保存，储存温度为-20℃。

人生就是博-尊龙凯时致力于提供优质的细胞生物技术产品，以支持您的生物医学研究与应用。